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pcr如何设置对照

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目标条带是193bp,用这个引物污染就没有消失过!!! ...

rtpcr数据分析中的对照是阴性对照吗: 这个对照是自己定义的,要在method里面说明,一般是选择阴性对照。

定量RT-PCR需要设置不同的阳性和阴性对照,这是为什么??: 我来作补充:
阴性对照很容易理解,如果阴性都P出来了,说明有污染,实验不可信;
阳性对照一方面是质控,如果阳性都没p出来,说明实验体系、条件和过程有问题,实验同样失败;另一方面,既然是定量PCR,要定量准确,需要有一系列的梯度阳性体系,做出标准曲线,才能对未知样品定量,就如同测定蛋白浓度或酶活,必须用标准品蛋白或已知酶活性的酶做梯度曲线,才能给未知样品定量。
若有疑问,欢迎继续讨论,纯属手打,欢迎采纳,祝愉快!

定量PCR阴性对照用什么水: 主要看你的CT值大约是多少,如果很大(大于40循环)那么可以判定结果没有问题,如果跟目的基因的CT一致或者为其他CT值那么判断为模板造成的气溶胶污染或者其他外缘DNA造成的污染。另外你阴性对照加的是水,那么说明你做梯度稀释的时候用的也是灭菌水,这个做荧光定量试验是很不规范的,建议用专门的荧光定量稀释液去做。

PCR进行中时,阳性对照选择什么试剂: 近期敦故侦查藏诨

定量pcr中,空白对照曲线什么样: 你说的空白对照应该是不加模板,用水代替模板吧。空白对照的溶解曲线和扩增曲线都是没有峰的。希望可以帮到你

菌落pcr电泳条带很淡,但是阳性对照却很亮,阴性对照也有淡淡的条带,为啥,: 初步判断有污染。
最好上图来看看,不然很难判断

做荧光定量pcr试验,按时间点取样,是不是每个时间点都得取个对照?: 对, 每个时间点都得取个对照
普通的PCR大多数是定性实验,而实时荧光定量PCR则定量和定性都可以做。应用领域也不一样,普通PCR一般应用于基因组克隆、DNA测序、RNA反转录等,而实时荧光定量PCR一般应用于mRNA表达量分析、绝对定量、蛋白表达、SNP分析、阴阳性解析等领域。不是定量PCR比PCR好,而是两者应用与不同的领域,起到了不同的作用。
荧光定量PCR较普通PCR不同的一点就是可以实时检测PCR扩增产物,从而可进行绝对定量或者相对定量。

16S 做PCR扩增 ,阴性对照有污染,全部试剂都换过了,污染依旧啊!!求大神指点!!!: 污染的条带大小与阳性一样?可以回收污染的条带,测序看看怎么回事,然后进行下一步

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